证候一直是中医药研究的核心问题,其中证本质研究是中医药现代化研究中最主要的攻关对象,但证候本身的复杂性使其很难通过现代医学还原论的方法来阐释。新涌现的代谢组学以其整体、动态、重视功能变化等特点,与中医证候对病理状态的表达理念不谋而合,在揭示证候的本质规律方面,代谢组学显示出较强的优势。本文通过对证本质研究与代谢组学技术在证本质研究中应用的现状进行综述和分析,发掘证本质研究与代谢组学技术之间存在的契合性及尚需解决的问题,并对其中关键问题进行思考,提出几点解决建议。

由于自然产品有化学多样性的特点,使之具有很高的实用性,无论是作为纯天然化合物或是标准化植物提取物,它们都为新药的开发提供了很多可能。与现代西药比较,草药通常被用于治疗慢性疾病。规范化操作可保证植物的一个或多个活性成分及化合物的含量。在新药研发方面,植物药的开发成本较低且资源丰富,但植物的生长环境和基因等因素会在很大程度上影响植物提取物的生物化学成分。植物药的生产要求源植物在基因方面的单种栽培完全符合标准条件,以保证其生物化学指标的一致性,并可以优化植物药的安全性和有效性。本文旨在讨论如何改进植物药提取的规范化操作方法以及如何有效制备质量及效果稳定的植物药。

中药制剂能体现中医简、便、廉、验的特点,但因其生产成本高,医院制剂室纷纷关闭,又由于相关法律法规的制约,中药制剂的发展陷入了困境。上海市浦东新区作为国家中医药发展综合改革试验区,积极探索医疗机构中医制剂规范化研究及区内推广应用。新区卫生局依托曙光医院,设立浦东新区医疗机构中药制剂区内多点规范化临床验证评价中心,通过筛选制剂、生产、质控及统一调配、多点规范化临床验证等流程,进行药物的配伍和稳定性评价,多中心临床疗效确证和安全性评估以及不良反应的监测,探索筛选、集中生产、调配使用、多点临床验证的长效机制。

无法考察交互作用的三因素设计包括交叉设计和拉丁方设计两种。这两种设计类型较为特殊,所考察的3个因素包括1个实验因素和2个区组因素。尽管这两种设计在实际科研中运用的频率不是很高,但若在合适的场合正确运用这两种设计类型,将有效控制样本量,取得很好的实验效果。由于篇幅限制,本文重点介绍交叉设计的前两种类型。

目的: 研制基于慢性胃肠疾病患者报告临床结局测量量表,筛选和优化条目。

方法: 通过查阅文献、参考现有量表、访谈患者、核心小组讨论等方法收集测量指标,经过条目优化、问卷形成、预调查等研制基于慢性胃肠疾病患者报告临床结局测量量表,现场调查慢性胃肠疾病患者274例,通过对调查结果进行离散趋势分析、因子分析、逐步回归分析、t检验和克朗巴赫系数法分析等筛选条目。

结果: 量表的35条条目中删除2条条目,6条需调整后进一步考查,同时还综合临床调查反馈信息对部分条目进行修改。

结论: 条目的科学筛选为量表调整提供了依据,今后将在更大样本调查基础上进行测试,使之不断完善。

目的:研究不同健康状态及亚健康各证型的脉象图参数,探求评价亚健康状态的特征性脉象图指标。

方法:运用“健康状态评价问卷H20.V2009”对1 275例无明确急慢性疾病者进行健康状态评估,并分为健康组和亚健康组,依据“亚健康状态辨证依据V2010”,对亚健康者进行辨证分型。另设明确诊断的患有心血管疾病的患者121例作为对照。用YJJ-101亚健康脉象监测系统采集脉象,分析主波幅度（amplitude of main wave, h₁）,重搏波前波幅度（amplitude of front wave, h₃）,重搏波幅度（amplitude of repeat wave, h₅）,主波上1/3处宽度（1/3 width of main wave, w₁）,主波上1/5处宽度（1/5 width of main wave, w₂）,左心室快速射血期时值（time of rapid ejection phase, t₁）,脉动周期（period of pulse, t）,脉象图总面积（square of pulse diagram, S）、收缩期面积（area in systole, As）、舒张期面积（area in diastole, Ad）,采脉压力（pulse pressure, Pp）和h₃/h₁、h₅/h₁、w₁/t、w₂/t、h₁/t₁比值等。

结果:健康组、亚健康组与疾病组3组比较：与健康组相比,亚健康组w₁/t、w₂/t增高,Pp、h₁、h₅、h₅/h₁、S、As、Ad降低;与疾病组相比,亚健康组Pp、h₅/h₁增高,h₁、w₂/t、S、As降低。健康组、实证组与虚证组3组比较：与健康组相比,实证组与虚证组均表现为h₃/h₁、w₁、w₁/t、w₂/t增高,h₁、h₅、h₁/t₁、h₅/h₁降低。健康组与各证候组比较：各证候组间比较,脉象图参数h₁、h₅在肝郁组、阴虚组、气虚组、实热组依次降低,脉象图参数h₃/h₁、w₁/t在肝郁组、实热组、阴虚组、气虚组依次升高,肾虚组脉象图指标h₁显著高于健康组及其他证候组。

结论:不同健康状态、亚健康不同类别及各证型的脉象图参数存在较明显差异,脉象图特征指标可作为客观评价不同健康状态、亚健康分类量化诊断、辨证分型研究的实验依据之一。

目的:寒热药性反映了中药的作用趋向,其认知概念具有模糊性特征,符合模糊数学的应用范畴。本文旨在通过建立药性生物学表达的模糊判别模式并运用其分析实验数据,为整体、综合地评价寒热药性提供方法学指导。

方法:首先,建立寒热药性表达模糊评价模式。以经典寒热复方效应作为寒热药性表达的基准方向,运用Fisher线性判别法计算寒热药性表达模糊集的隶属度函数,进一步得到寒性表达函数和热性表达函数,并以此作为评价参数。第二,对评价模式进行实践。以姜附桂方作为经典热性复方,以三黄方作为经典寒性复方,以各系统生化指标考察药性表达,建立寒、热性表达方程。在此基础上,收集热性药肉桂、仙茅,寒性药黄柏、栀子干预正常状态,以及糖皮质激素诱导的虚寒和虚热状态模型的生物学实验数据,将药物干预前后机体状态的相对变化量代入评价模式,分析其药性表达特征。

结果:肉桂干预正常、虚寒和虚热3个状态的热性表达均值大于寒性表达均值,分别为0.528>0.221、0.203>–0.490、1.750>–0.479;仙茅干预正常和虚寒状态的热性表达均值大于寒性表达均值,分别为0.474>–1.601、0.288>–1.923,体现了药物的热性;黄柏干预正常状态和虚寒状态的寒性表达均值大于热性表达均值,分别为0.798>–0.870、0.194>–0.339;栀子干预虚热状态的寒性表达均值大于热性表达均值0.354>–1.802,体现了药物的寒性。

结论:运用寒热药性模糊评价模式,可以有效分析出药物的寒热药性和药性表达方式。药性相同的中药,既有共性表达,也有个性表现。寒热药性表达具有多途径特点。

目的:通过比较益气健脾、温阳健脾、温阳利水等不同治法防治非酒精性单纯性脂肪肝（nonalcoholic simple fatty liver, NAFL）的疗效差异,探讨NAFL的中医病机。

方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、四君子汤组、理中汤组、苓桂术甘汤组和肾著汤组。正常组大鼠喂食普通饲料,其余大鼠均喂食高脂饲料（88%普通饲料+10%猪油+2%胆固醇）诱导脂肪肝;各药物组分别再给予四君子汤、理中汤、苓桂术甘汤及肾著汤药物干预。治疗4周后,测量肝质量、附睾脂肪质量,计算肝脏指数、附睾脂肪指数;苏木精和伊红染色观察大鼠肝脏病理改变;检测血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase, ALT）、天冬氨酸氨基转移酶、三酰甘油（triacylglycerol, TAG）、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆固醇和肝组织TAG含量。

结果:模型组大鼠体质量、肝脏指数、附睾脂肪指数以及肝组织TAG水平均显著升高（P<0.05）,苓桂术甘汤、肾著汤可减轻高脂饮食诱导的NAFL模型大鼠肝细胞脂肪浸润,显著降低模型大鼠肝组织TAG水平（P<0.05）以及血清TAG和ALT水平（P<0.05）,苓桂术甘汤还可显著降低附睾脂肪指数和血清总胆固醇水平（P<0.05）;四君子汤、理中汤对模型大鼠肝组织TAG水平均无明显的改善作用（P>0.05）。

结论:温阳、利水药苓桂术甘汤、肾著汤对脂肪的代谢有促进作用。温阳利水兼施可能是防治NAFL的有效方法。

目的:探讨黄芪主要有效成分黄芪甲苷和三七主要有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1配伍抗氯化钴（cobalt chloride, CoCl₂）诱导的PC12细胞氧化损伤的作用及其机制。

方法:应用CoCl₂诱导经神经生长因子转分化的PC12细胞氧化损伤模型,经不同药物处理后,采用Hocchst 33258荧光染色检测细胞凋亡,罗丹明123荧光染色检测细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential, MMP）,2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光染色检测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平。

结果:CoCl₂能引起转分化后的PC12细胞凋亡,同时PC12细胞MMP水平显著降低,ROS生成显著增加。黄芪甲苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1均能不同程度地抑制CoCl₂诱导的PC12细胞凋亡,减少损伤后ROS的生成和MMP的下降,4个有效成分配伍的效应强于各有效成分单用。

结论:黄芪和三七的主要有效成分能抑制氧化损伤后的PC12细胞凋亡,有效成分配伍后作用加强,其机制可能与抑制细胞活性氧的生成,提高线粒体膜电位有关。

目的:观察中药脑栓通对脑缺血再灌注大鼠神经血管单元主要成分神经元、星形胶质细胞以及脑血管内皮细胞的保护作用。

方法:30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和1 g/（kg·d）脑栓通组。采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血损伤模型,1.5 h后拔出线栓实施再灌注。再灌注24 h时后进行大鼠神经功能缺损评分,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷原位末端标记法结合神经元核抗原、胶质纤维酸性蛋白及CD31免疫荧光双染检测缺血再灌注24 h时缺血灶周边的神经元、星形胶质细胞以及脑血管内皮细胞的凋亡情况。

结果:脑栓通能显著改善脑缺血损伤大鼠的神经功能缺损,减少缺血灶周边星形胶质细胞、脑血管内皮细胞和神经元的凋亡。

结论:脑栓通通过保护脑缺血再灌注后大鼠的神经血管单元促进神经功能的改善。

目的:建立气阴两虚、瘀血阻络型糖尿病合并局灶性脑缺血大鼠模型,观察具有益气养阴活血功效的参芎玉精颗粒对模型大鼠海马齿状回区神经细胞的增殖、分化和存活的影响。

方法:将大鼠分为假手术组、糖尿病合并脑缺血（气阴两虚、瘀血阻络证）模型对照组、参芎玉精组和参芎组,每组20只,采用5-溴-2′-脱氧尿嘧啶掺入法、免疫组织化学法观察参芎玉精颗粒对糖尿病合并脑缺血大鼠神经细胞增殖、分化和存活的影响。

结果:糖尿病合并脑缺血可使大鼠海马齿状回颗粒下层的新生细胞增多,参芎玉精颗粒作用7 d时不能促进糖尿病合并脑缺血大鼠颗粒下层新生细胞的增殖(P>0.05),但治疗21 d后,可以明显提高新生细胞的存活率,促进新生细胞向神经元分化（P<0.01）,并优于参芎颗粒（P<0.01）。

结论:以益气养阴活血法组方的参芎玉精颗粒可促进气阴两虚、瘀血阻络型糖尿病合并脑缺血大鼠新生神经细胞的存活,并促进其向神经元分化,效果优于益气活血法。

目的:比较可疑致敏原绿原酸、异绿原酸与人血清白蛋白（human serum albumin, HSA）的分子结合模式和结合能力。

方法:采用Molegro Virtual Docker (MVD)软件,以华法令、地西泮和HSA共结晶复合物作为受体模板,比较绿原酸和异绿原酸（3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸）在HSA载药位点Ⅰ和Ⅱ的分子对接情况,以对接评分、关键氨基酸基团和氢键作用确定分子的结合模式。

结果:绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸在HSA位点Ⅰ的分子对接分值为–112.3、–155.3和–153.1,在HSA位点Ⅱ的对接分值为–101.7、–138.5和–133.4。在位点Ⅰ,两个异绿原酸分子与关键脂溶性基团Ala291和Leu238的疏水力明显大于绿原酸;异绿原酸、绿原酸与该位点入口和内部不同的极性氨基酸基团形成氢键;与绿原酸分子相比,异绿原酸的第2个咖啡酰基占居该位点右侧亲脂区。在位点Ⅱ,异绿原酸的第2个咖啡酰基增加了其与极性氨基酸的作用。

结论:异绿原酸与绿原酸相比,有更高的HSA分子对接评分,其多出的一个咖啡酰基增加了与HSA载药位点的结合能力。

目的: 研究中药丹参的主要成分丹参素对肝星状细胞（hepatic stellate cell, HSC）活化与增殖的影响。

方法:乙醛与HSC-T6共同孵育诱导细胞活化,再分别应用不同浓度的丹参素进行干预。四甲基偶氮唑盐（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT）比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,实时定量聚合酶链反应法分析细胞Ⅰ型纤溶酶原激活剂抑制物（plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1）、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）、尿激酶型纤溶酶原激活因子（urokinase-type plasminogen activator, uPA）和基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2, MMP-2）的基因表达。

结果: MTT比色法检测表明丹参素可抑制由200 μmol/L乙醛诱导的HSC增殖,流式细胞术分析发现丹参素可使处于S期的细胞数量明显增加（P<0.05）。此外,丹参素还能下调TGF-β1和PAI-1的基因表达,并增加uPA的转录水平（P<0.01）,但对MMP-2的表达没有明显影响。

结论: 丹参素可抑制乙醛诱导的HSC-T6的活化与增殖,并可调节参与细胞外基质沉积的细胞因子的表达。

目的:以往研究已证实,棱果榕树叶的乙醇提取物及其乙酸乙酯萃取物（ethyl acetate soluble fraction, EASF）对人类乳腺癌细胞T47D有很强的细胞毒效应。本研究将进一步明确棱果榕树叶乙醇提取物的EASF联合阿霉素对人类乳腺癌T47D细胞系在细胞毒性、细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡方面的协同效应。

方法:使用溴化噻唑蓝四氮唑比色法分析T47D细胞毒性效应,流式细胞仪进行细胞周期分析,ModFit LT 3.0程序进行数据处理;采用溴化乙锭/吖啶橙双染色法检测细胞凋亡;免疫组织化学法识别T47D细胞系的聚ADP-核苷酸聚合酶（poly ADP-ribose polymerase, PARP）的表达。

结果:EASF（0.875~7 μg/mL）与阿霉素（2~8 nmol/L）联合使用比单纯使用阿霉素能更有效地抑制T47D细胞生长。此外,二者联合使用能够增加细胞凋亡的发生率。研究发现,EASF能通过改变细胞从G₂/M期至G₁期而增强阿霉素的细胞毒效应。并且,二者的结合比单独使用能刺激T47D细胞中裂解性PARP的表达。

结论:EASF可以通过诱导细胞凋亡和细胞周期停滞加强T47D细胞中的阿霉素活性。

目的:通过二甲基苯蒽（7, 12-dimethylbenz[a]anthracene, DMBA）诱导雄性白化小鼠肾组织损伤来研究油椒木豆荚的水乙醇提取物对肾脏的保护作用。

方法:予实验小鼠口服15 mg/kg DMBA两周前,分别予200和400 mg/kg的油椒木豆荚的水乙醇提取物以及浓度为0.5%和1%的叔丁基对羟基茴香醚灌胃。测定各组小鼠细胞色素（cytochrome, Cyt）P450及Cyt b5、还原型谷光甘肽（reduced glutathione, GSH）、谷胱甘肽转移酶（glutathione-S-transferase, GST）以及肾组织天冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase, AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine transaminase, ALT）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）活性及总胆固醇和蛋白质含量。

结果:口服15 mg/kg的DMBA可显著增加小鼠Cyt P450和Cyt b5的浓度（P<0.01）。小鼠肾组织GSH、GST活性显著降低（P<0.01, P<0.05）。实验小鼠在口服DMBA后,肾组织AST、ALT、ALP活性和蛋白质含量也显著降低,总胆固醇含量则显著增加（P<0.01）。但是经200和400 mg/kg油椒木豆荚提取物预处理14 d的实验小鼠,其由DMBA诱发的各项组织生化指标变化发生显著逆转（P<0.01）。

结论:油椒木豆荚的提取物可通过提高细胞抗氧化活性、减少自由基的生成来减少DMBA的毒副作用,起到保护肾组织的作用。