从中医临床科研思路与方法的角度,回顾历史,总结中医临床辨证与辨病结合的研究成果和经验,认为“证”的研究是中医临床研究中一项关键性的课题。近十几年来,西医学有关新发现疾病及其诊断方法的发展较快,而中医“证”的研究却进展滞后,究其原因主要有：（1）辨证分型固定化,不求发展;（2）辨病为主,辨证为辅;（3）只对病下药,不对症下药。针对这种情况,笔者提出开展“证中求病,病中求证”的临床研究思维方法,从辨证与辨病结合的研究实践中,不断探索未知,不断发现新的疾病和证,以提高中医临床辨病诊断和辨证诊断的水平,为中医基础理论和药学研究提供丰富的临床资源和条件,加快中医药走向世界。

目的 通过对中草药临床随机对照试验中有关中草药质量控制的方法进行分析评价,探讨如何实施中草药临床试验的药物质量控制。方法 文献检索2005年7月前发表于Cochrane图书馆的中草药系统评价共11篇,包含167个中草药临床随机对照试验,实证分析中草药临床试验中有关中草药质量控制的方法。结果 在纳入分析的167个中草药临床随机对照试验中,所采用的中草药制剂类型共有11种,其中只有1个临床随机对照试验提及中药的质量控制方法。结论 在中草药临床随机对照试验过程中,中草药的质量控制是一个非常薄弱的环节。建议：在中草药临床随机对照试验过程中,必须提高中草药的质量控制意识及建立中草药质量控制的技术平台,整合包括中药材生产质量管理规范（Good Agricultural Practice, GAP）、药物生产质量管理规范（Good Manufacturing Practice, GMP）、药物临床试验质量管理规范（Good Clinical Practice, GCP）以及中药指纹图谱等技术,建立系统控制临床试验药物的质量控制体系。

阐述近代名医祝味菊著作《伤寒质难》中的学术思想,指出其关于中西医汇通方面的思想具有一定的先进性,但尚未引起中医界足够的重视。祝氏以《伤寒论》六经辨证论治为例,指出中医治法的本质为顺应或增强人体的自愈、自调节能力。其中,人体的阳气是人体患感染性疾病时主要的自愈能力,因此祝氏在治疗时重视扶阳,擅用附子等温热药物。此外,祝氏将外感内伤病的中医辨证概括为“五段八纲”。总之,在中西医汇通史上,祝氏作出了极为重要的贡献,对于指导临床思维和中医药的现代研究,具有重要的启示作用。

目的 研究中药益髓生血颗粒对β地中海贫血患者α血红蛋白稳定蛋白（alpha-hemoglobin stabilizing protein, AHSP）及红系转录因子GATA-1表达的影响,探讨中药治疗β地中海贫血的临床疗效及分子机制。方法 2004年9月~2005年2月收治中间型β地中海贫血患者12例,采用益髓生血颗粒治疗3个月。比较治疗前后患者血红蛋白、胎儿血红蛋白、红细胞、网织红细胞等血液学参数的变化;提取其中8例患者用药前后骨髓有核细胞总RNA,采用实时PCR技术检测AHSP mRNA和转录因子GATA-1 mRNA的表达。结果 治疗后患者临床症状明显改善,其血红蛋白、胎儿血红蛋白、红细胞和网织红细胞等血液学参数较治疗前明显升高,差异有统计学意义。其中8例患者骨髓有核细胞AHSP和GATA-1 mRNA的表达量与治疗前比较有明显升高,差异有统计学意义。结论 中药益髓生血颗粒治疗β地中海贫血的可能机制之一为通过调节β地中海贫血患者体内骨髓有核细胞转录因子GATA-1 mRNA的表达,使GATA-1与其他转录因子协同作用,上调AHSP mRNA的表达,使AHSP合成增加以结合地中海贫血患者体内游离的相对过剩的α珠蛋白,阻止其在活性细胞中的沉积,遏制其对红细胞的毒害作用,从而减少溶血的发生。

目的 探讨血脂康胶囊和普罗布考对冠心病患者的降脂作用及其对血管内皮功能、氧化还原态的影响。方法 112例冠心病患者,随机分为血脂康组（56例）和普罗布考组（56例）。治疗前及治疗8周后,检测2组患者血总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triglycerides, TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol, LDL-C）、一氧化氮（nitric oxide, NO）、内皮素-1（endothelin-1, ET-1）、还原型谷胱甘肽（glutathione, GSH）和氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione, GSSG）的水平,并计算GSH/GSSG氧化还原电位。结果 血脂康组患者治疗后血TC、LDL-C和TG水平较治疗前降低,普罗布考组患者血TC、LDL-C水平较治疗前降低,差异均有统计学意义。血脂康组患者治疗后血ET-1、GSSG水平及GSH/GSSG氧化还原电位较治疗前降低,血GSH、NO水平及NO/ET-1、GSH/GSSG比值较治疗前升高,差异均有统计学意义。结论 血脂康胶囊和普罗布考对冠心病患者均有降脂作用。血脂康胶囊对血管内皮功能具有一定的保护作用,可使GSH/GSSG氧化还原态向还原方向偏移。

目的 探讨血府逐瘀汤对不稳定型心绞痛患者血管内皮功能的影响。方法 50例不稳定型心绞痛患者随机分为血府逐瘀汤组32例和对照组18例。对照组予以常规治疗;血府逐瘀汤组在常规治疗的基础上加服血府逐瘀汤,两组均用药8周。分别采用放射免疫法、酶法、酶联免疫吸附测定法检测血清内皮素（endothelin, ET）、一氧化氮（nitric oxide, NO）、可溶性血管细胞黏附分子-1（soluble vascular cell adhesion molecule-1, sVCAM-1）及可溶性细胞间黏附分子-1（soluble intercellular adhesion molecule-1, sICAM-1）含量的变化。结果 血府逐瘀汤组总有效率为93.75%,明显优于对照组的66.67%（P＜0.05）。血府逐瘀汤组血清ET、sVCAM-1及sICAM-1的水平均明显低于对照组（P＜0.01）,血清NO的水平则高于对照组（P＜0.01）。结论 血府逐瘀汤可以通过降低缩血管因子水平、提高舒血管因子水平及减少细胞黏附分子的途径,改善血管内皮的功能从而提高对不稳定型心绞痛的疗效。

目的 观察健康女性月经前后穴位伏安特性的变化规律,研究穴位伏安特性与人体气血变化的关系,创建气血变化定量研究新方法。方法 应用自制的穴位伏安特性计算机检测系统对健康女性月经前、月经时及月经后手三阴经原穴太渊、大陵、神门进行伏安特性检测。结果 月经前后太渊、大陵、神门穴均有部分扫描点电阻发生了明显的变化,以大陵最为明显、太渊次之、神门最不明显,差异均有统计学意义。在三个穴位所有电阻发生明显变化的扫描点中,穴位电阻随月经进程变大的比率为70.6%。结论 穴位伏安特性随月经的进程而变化,这种变化具有穴位特异性。穴位电阻随月经进程而变大,这可能与月经后机体血量减少有关。穴位伏安特性有可能作为研究气血变化的定量指标。

目的 建立人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株。方法： 采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的诱导方法建立5-FU获得性BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株。MTT法检测耐药细胞株对多种化疗药物的交叉耐药性。观察其细胞形态学、生长曲线、倍增时间、平板克隆形成率、贴壁率、细胞周期分布、染色体核型以及裸鼠致瘤性。流式细胞术检测阿霉素在亲本及耐药细胞株内的积聚量。免疫细胞化学法检测胸苷酸合酶在耐药细胞内的表达。结果： 成功建立人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株模型。该耐药细胞对阿霉素、长春新碱、奥沙利铂及甲氨蝶呤均有不同程度的交叉耐药性,但对羟基喜树碱仍较敏感。体外培养见细胞趋向群集性生长。耐药细胞株倍增时间较亲本细胞株长,克隆形成率则较亲本细胞株低,差异有统计学意义。耐药细胞贴壁率在2、3 h明显低于亲本细胞株,其G0/G1期细胞分布比率较低而S期比率明显增加。阿霉素在耐药细胞株内的积聚量低于亲本细胞株,耐药细胞株胸苷酸合酶的蛋白表达量较亲本细胞株明显增强。结论： 人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株可以成为研究5-FU获得性耐药机制及开展多药耐药逆转剂筛选较好的体外模型。

目的 观察扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌H22细胞凋亡率及线粒体膜电位的影响。方法 48只荷瘤小鼠随机分为模型组、环磷酰胺治疗组、扶正抑瘤颗粒大剂量治疗组和扶正抑瘤颗粒小剂量治疗组,分别予以相应药物治疗14 d。碘化丙啶染色,流式细胞术检测各组小鼠肝癌H22细胞的凋亡率。采用荧光探针罗丹明123负载,激光扫描共聚焦显微镜下观察H22细胞的荧光强度,分析H22细胞线粒体膜电位的大小。结果 扶正抑瘤颗粒可以提高小鼠肝癌H22细胞的凋亡率,降低H22细胞的线粒体膜电位,与模型组比较,差异有统计学意义。结论 扶正抑瘤颗粒的抗肿瘤机制可能与降低肿瘤细胞线粒体膜电位,诱导肿瘤细胞凋亡有关。

目的 评价金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞的抑制作用。方法 50只裸鼠建立原位移植人胃癌MKN-45细胞模型,随机分为模型组,金龙蛇颗粒高、中、低剂量组和5-FU干预组。各组裸鼠予以相应药物实施干预。观察各组荷瘤裸鼠一般情况,肿瘤生长情况及抑瘤率。流式细胞仪检测肿瘤细胞周期分布及细胞凋亡情况。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide, Annexin V-FITC/PI）双标记染色法鉴别早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞。电镜下观察肿瘤细胞的超微结构变化。结果 金龙蛇颗粒高、中、低剂量组的抑瘤率分别为68.13％、55.94％和50.31％,呈剂量依赖效应,与5-FU干预组抑瘤率比较,差异无统计学意义。金龙蛇颗粒各剂量组肿瘤细胞凋亡率为22.81％~38.54％,亦呈剂量依赖效应,且肿瘤细胞主要被阻滞于G0/G1期。Annexin V-FITC/PI双标记染色结果显示,金龙蛇颗粒各剂量组以早期凋亡细胞居多,5-FU干预组则以晚期凋亡细胞和坏死细胞居多。结论 金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞具有较好的抑制作用,促进MKN-45细胞凋亡可能是其抗肿瘤治疗的主要作用机制之一。

目的 采用复合因素制备大鼠酒精性肝纤维化模型。方法 Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、酒精性肝纤维化模型组和微量CCl4处理组。酒精性肝纤维化模型组大鼠予以喂食酒精、玉米油、吡唑,结合微量CCl4腹腔注射造模。微量CCl4处理组仅予以微量CCl4腹腔注射。观察各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase, ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）、γ谷氨酰转肽酶（gamma-glutamyltransferase, γ-GT）水平和肝组织病理学的变化。结果 造模第12周,成功建立大鼠酒精性肝纤维化模型。在造模期间,肝脏组织病理学依次表现为酒精性脂肪肝、肝炎、肝纤维化。酒精性肝纤维化模型组大鼠肝/体比值,血清ALT、AST及γ-GT水平与正常对照组比较,差异均有统计学意义。结论 酒精灌胃结合微量CCl4腹腔注射制备酒精性肝纤维化动物模型,具有模型稳定、成功率高的特点,并可提供不同阶段酒精性肝病的实验模型。

目的 观察白背叶根体内抗鸭乙型肝炎病毒（duck hepatitis B virus, D-HBV）的作用。方法 采用PCR技术筛选D-HBV阳性3日龄广州麻鸭40只。将麻鸭随机分为空白对照组,白背叶根高、中、低剂量组和拉米夫定组,分别给予相应药物进行干预。用药前、用药第7、14、21天及停药第7天,取各组麻鸭静脉血,采用实时定量荧光PCR技术检测血清D-HBV DNA含量;治疗前后取肝脏组织进行病理组织学观察。结果 拉米夫定组于用药后,血清病毒水平迅速降低,但停药后存在反跳现象。白背叶根高、中剂量组分别于治疗第14、21天其血清病毒含量明显下降,低剂量组治疗期间未见明显的抑制病毒作用。停药后,白背叶根高、中剂量组与空白对照组比较仍表现出一定的病毒抑制作用。白背叶根高剂量组对肝脏炎症的改善作用较拉米夫定组明显。结论 白背叶根有抑制体内D-HBV复制的作用,其作用大小与剂量及用药时间相关;其治疗作用较拉米夫定弱,但作用维持时间长,且用药较为安全。

目的 探讨肾疏宁对肾小球硬化大鼠肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor, HGF）的影响。方法 采用单侧肾切除及尾静脉注射阿霉素方法建立大鼠肾小球硬化模型。42只造模大鼠随机分为模型组,肾疏宁治疗组和苯那普利治疗组,另设8只大鼠作为假手术组。肾疏宁治疗组和苯那普利治疗组分别予以肾疏宁和苯那普利治疗8周,其余两组予以等量蒸馏水灌胃。治疗8周末,测定大鼠24 h尿蛋白定量（urine protein, Upr）、血清肌酐（creatinine, Cr）和尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）;光镜下观察各组大鼠肾组织病理形态学改变,比较各组大鼠肾小球毛细血管直径、系膜基质和肾小球硬化指数;采用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）技术检测肾组织HGF mRNA的表达水平。结果 模型组大鼠24 h Upr、血清Cr和BUN较假手术组明显升高（P＜0.01）;肾小球硬化呈弥漫性分布,肾小球内部分毛细血管腔缩小或塌陷闭塞,系膜基质增多,系膜区增宽,肾小球硬化指数3.32±0.35;肾组织HGF mRNA的表达明显下调（P＜0.05）。肾疏宁治疗组和苯那普利治疗组大鼠24 h Upr、血清Cr和BUN较模型组明显降低（P＜0.01）;系膜细胞增生和系膜基质明显减少,毛细血管开放好转,肾小球硬化指数降低（P＜0.01）;肾组织HGF mRNA的表达明显上调（P＜0.01）。结论 肾疏宁可以上调肾组织HGF mRNA的表达,减少系膜基质,改善肾脏病理形态,延缓肾小球硬化的进程。

目的 建立大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞体外自然退变模型,为椎间盘退变的机制研究提供载体。方法 酶消化及自然传代法分离培养大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞,观察其形态学变化。采用MTT法测定第Ⅲ代软骨细胞的生长曲线。采用免疫细胞化学法检测其特征性Ⅱ型胶原的表达情况,对该模型进行鉴定。结果 大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞表达特征性Ⅱ型胶原。第Ⅲ代细胞培养在生长第13天后,细胞分裂能力明显下降,核仁不清,细胞变形明显,以梭形为主,折、旋光性弱,细胞间隙变大,轮廓增强,胞浆内可见空泡、脂滴;Ⅱ型胶原合成明显下降,细胞增殖率显著降低;呈现自然退变过程。结论 建立椎间盘软骨终板软骨细胞体外自然退变模型,为椎间盘退变机制研究提供较好的细胞学基础。

目的 寻找与灵芝孢子促进受损伤脊髓运动神经元存活及其轴突再生相关的蛋白质。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和灵芝孢子治疗组。模型组和灵芝孢子治疗组大鼠行脊神经腹根切断术。灵芝孢子治疗组大鼠胃饲灵芝孢子14 d。取各组大鼠脊髓灰质组织蛋白质,行双向电泳,采用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱仪鉴定各组之间有明显差异表达的蛋白质。结果 各组之间共有6种蛋白质的表达存在差异,分别是塌陷反应介导蛋白2（collapsin response mediator protein 2, CRMP-2）、纤维型肌动蛋白加帽蛋白β（F-actin capping protein beta subunit, FCP-β）、异柠檬酸脱氢酶β（isocitrate dehydrogenase [NAD] subunit beta, IDH-β）、三磷酸腺苷酶（ATPase）、谷氨酸草酰乙酸氨基转移酶1（glutamate oxaloacetate transaminase-1, GOT1）和丙酮酸激酶-M2（M2 pyruvate kinase, M2-PK）。灵芝孢子治疗组CRMP-2、IDH-β、ATPase和GOT1的表达高于模型组,而FCP-β和M2-PK的表达则低于模型组。结论 灵芝孢子可能通过上调或下调上述蛋白质的表达,参与促进大鼠受损伤脊髓运动神经元存活及其轴突再生作用。

目的 观察大豆异黄酮（soybean isoflavones, SI）对去卵巢大鼠骨组织中骨保护素（osteoprotegerin, OPG）和骨保护素配体（osteoprotegerin ligand, OPGL）mRNA表达的影响,探讨SI防治绝经后骨质疏松（postmenopausal osteoporosis, PMO）的作用机制。方法 健康雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组和SI治疗组。假手术组仅牵动卵巢,其余两组均行双侧卵巢切除术。SI治疗组造模后予以SI 50 mg·kg ^–1·d ^–1灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,1次/d,每周用药6 d,共12周。12周后取大鼠L3~L6脊椎行骨密度检测。取大鼠左侧股骨提取总RNA,采用实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction, RTQ-PCR）技术检测OPG和OPGL mRNA的表达水平。 结果 SI可以增加去卵巢大鼠的腰椎骨密度,上调去卵巢大鼠骨组织中OPG mRNA的表达水平,使OPGL mRNA/OPG mRNA比值下降,但对OPGL mRNA的表达则无明显影响。结论 SI防治PMO的效应可能与其调控OPG mRNA的表达及OPGL mRNA/OPG mRNA比值相关。

目的 观察抗风湿颗粒（Kangfengshi Granules, KFSG）对胶原诱导关节炎大鼠骨组织中骨保护素（osteoprotegerin, OPG）、核因子-κB受体激活因子配体（receptor activator of nuclear factor-κB ligand, RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor, M-CSF）mRNA表达的影响,探讨KFSG治疗类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）的作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、环孢菌素A（cyclosporine A, CsA）治疗组和KFSG治疗组。除正常对照组外,其余各组大鼠予以皮下注射Ⅱ型胶原诱导关节炎模型。治疗4周后,采用实时定量PCR技术检测各组大鼠骨组织中OPG、RANKL和M-CSF mRNA的表达水平。结果 造模大鼠90%出现关节炎症状。治疗4周后,模型组、CsA治疗组和KFSG治疗组与正常对照组比较,RANKL mRNA和M-CSF mRNA的表达增高,OPG mRNA的表达降低,RANKL mRNA/OPG mRNA比值亦增高,差异均有统计学意义。KFSG治疗组与模型组比较,OPG mRNA的表达水平上调,M-CSF mRNA的表达水平下调,RANKL mRNA/OPG mRNA比值下降,差异均有统计学意义。结论 KFSG治疗RA骨质破坏的分子机制可能与其上调OPG mRNA的表达、下调M-CSF mRNA的表达及降低RANKL mRNA/OPG mRNA比值有关。

目的 采用针刺手法参数实时采集及教学演示系统实现针刺手法的数据化处理和分析,以满足针灸教学和科研的需要。方法 通过研制针刺传感器,对针刺手法操作过程中参数的变化进行实时采集和观察。结果 在作针刺提插手法时,针体作匀变速运动,得气时作用力依然存在;在作捻转手法时,捻转次数和弧度的改变可引起阻力矩的变化,且与机体反应有关;在作摇摆手法时,针刺的摆动幅度与作用力、作用点及方向等因素有关。结论 该系统为针刺手法的量化研究以及教学提供了新的手段。